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脫水效果不好補救方法
在病理常規(guī)制片過程中,經常會遇到石蠟組織切片困難或無法切片的情況。在某些情況下,即使是正確及時的固定及處理程序,也可能會因為組織本身的大小、質地的不同而使組織蠟塊的處理出現(xiàn)一定的問題。如子宮肌瘤、甲狀腺、皮膚嚴重角化、指甲及血凝塊等都是具有挑戰(zhàn)性的標本。本文就組織蠟塊處理不足和組織蠟塊處理過度兩個方面進行綜述。
1.對問題蠟塊進行評估
通常,我們遇到難切或無法切出的蠟塊,首先是要找出哪里出錯了,然后決定怎么處理。一般我們從組織的處理過程進行判斷[1]:(1) 取材大小是否規(guī)范;(2) 固定是否及時,固定液配制是否正確;(3) 組織處理試劑的使用情況,機器是否出現(xiàn)故障;(4) 如果試劑是新更換的應重新檢查試劑瓶,確認液體平面,是否有污染,試劑順序是否正確,試劑瓶密封狀況等[3];(5) 如果還是無法判斷問題所在,還可以通過粗修蠟塊,仔細檢查組織情況,并有鼻子聞一聞,以確定組織中是否有有機溶劑殘留來幫助評估。
2.引起組織蠟塊處理不足的原因,表現(xiàn)以及解決方法
2.1 蠟塊經切片24小時以后,組織表面發(fā)生凹陷,這是由于組織中含有溶劑殘留,無法被石蠟完全替換,經切片后組織表面長時間暴露在空氣中,殘留溶劑蒸發(fā),組織塊退縮到蠟塊中,解決方法,我們以熱丙酮為介質,脫去組織內剩余的水分并使石蠟充分滲透,所制蠟塊可能會順利切片[2]。
2.2 蠟塊經切片后,只有破碎零散的組織輪廓可以被切除,組織的中央?yún)^(qū)并不缺水干燥,也不是被脫水試劑融化清除了,而是石蠟滲透不完全,組織松軟空洞,不支持切片,通常會引起這個問題的組織是大的乳腺組織,脂肪較多,溶劑滲透緩慢,處理周期太短,應相應延長處理周期,重新處理會得到理想的效果。
2.3 粗修蠟塊可以聞到殘留試劑的味道,用手按壓組織質地與邊上的石蠟不同,是較軟的,這是由于組織中有水分,酒精及二甲苯的殘留,固定不足,脫水不足,透明不足,均可導致殘留以致滲蠟不完整,這種情況再處理時最好的選擇。
2.4 當攤片的時候,切片出現(xiàn)‘出汗’現(xiàn)象,即部分組織遇到熱水迅速瓦解[3],這是由于不完全脫水,在切片表面有時伴有試劑殘留的小油滴或僅僅是因為浸蠟的石蠟純度不夠,里面摻雜了加多二甲苯也會引起這個情況。遇到這種情況,降低攤片池水溫及縮短漂片時間[3],便可以獲得較完整的切片。
通常在組織固定及時正確的前提下,出現(xiàn)的組織處理不足時可被補救的 除了上述臨時補救方法以外,我們還可以適當調整延長處理周期或者直接更換試劑[4],對其從頭進行再處理。這也是解決方法中效果最理想的一種。
3.引起組織蠟塊處理過度的原因,表現(xiàn)及解決方法
3.1組織處理后出現(xiàn)酥,脆。易碎的現(xiàn)象,表現(xiàn)該組織被過度處理,純酒精脫水時間太長,二甲苯透明時間太長,石蠟中二甲苯摻雜均可引起。應將粗修過的組織面放在冰水中浸泡或用氨水等軟化劑軟化再重新仔細切片。
3.2 包埋時組織顯得干癟,很硬,通常被描述為‘熟嵌入’,常由于組織處理過程中溫度太高,特別是浸蠟溫度太高,浸蠟時間太長所造成的組織不可遞的損傷。
3.3 組織出現(xiàn)‘干粉狀’或‘豆腐渣’樣[4],多數(shù)是由于組織本身比較質嫩,無法適應常規(guī)的處理周期引起的,如甲狀腺,肝臟,淋巴結等,切片在鏡下呈‘百葉窗’狀,嚴重的甚至肉眼可見廣泛的裂紋。
3.4 組織邊緣區(qū)域脆不能被切片,而中間部分則比較滿意。這是由于組織長期暴露在處理試劑中,而外部形態(tài)受到影響,中間部分與接觸試劑少,形態(tài)保持較好。
總之,處理過度的組織經重新處理一般是不會有幫助的,通常我們的處理方法是把蠟塊粗修后放在冰水中浸泡或用5mmol/L鹽酸水[5]浸泡或者用氨水[6]等軟化劑軟化,再緩慢仔細地重新切片可以得到更完整的切片,切片時刻度比平時薄一些效果可能會更好。
4.如何制作出一張優(yōu)質的HE切片[7]
在日常的工作中,不論是大醫(yī)院還是小一些的基層醫(yī)院。HE石蠟切片都會出現(xiàn)各種的問題,其中除了經驗及設備等原因外,組織蠟塊的處理往往受到組織大小,質地,環(huán)境溫度,濕度等客觀因素的影響,而出現(xiàn)個別組織甚至一整批組織不能做出滿意的切片,從而影響病理醫(yī)生作出正確的診斷,從而造成誤診。
我們除了要分析出現(xiàn)蠟塊難切甚至無法切出的原因并及時補救外,更要對可能出現(xiàn)的問題做出有效的預防:(1)設定不同的處理周期醬大小標本分類處理;(2)根據(jù)每個單位不同的情況按時間或者標本量更換試劑;(3)定期對脫水機進行保養(yǎng)維護等;(4) 制定一系列操作規(guī)范,并嚴格按照規(guī)范進行操作[8],降低出現(xiàn)問題蠟塊的幾率。
【參考文獻】
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[5]馬恆輝,章如松.組織切片裂隙產生的原因及對策[J].診斷病理學雜志,2007,24(2):478-481.
[6] 戴煒力,王群姬.病理組織切片縫隙補救方法的技術改良[J]. 溫州醫(yī)學院學報,2010,30(2): 173.
[7] 王曉鴻,曹婉雅.制作優(yōu)質HE病理組織切片的要素[J].中國實用醫(yī)藥,2011,(6):135-136.
[8] 徐思行,余心如.病理診斷與技術規(guī)范[M].第1版.杭州:浙江大學出版社,2003.3.